豚鼠干擾素-γ ELISA 檢測試劑盒溫州，松原

　　　　　　　　　　本試劑僅供研究使用      標本：血清或血漿

試驗原理：
　　　　IFN-γ試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知IFN-γ濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將IFN-γ和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中IFN-γ的濃度呈比例關系。
　　　　
試劑盒內容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標記的抗IFN-γ抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
標本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

豚鼠干擾素-γ ELISA 檢測試劑盒溫州，松原

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

豚鼠干擾素-γ ELISA 檢測試劑盒溫州，松原

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
800 pg/ml （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 pg/ml （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 pg/ml （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 pg/ml （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 pg/ml （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 pg/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 pg/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。

豚鼠干擾素-γ ELISA 檢測試劑盒溫州，松原

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的IFN-γ標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的IFN-γ含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-800pg/ml

4、敏感度： 1.0 pg/mlβ-arrestin 1（beta-arrestin 1） β-抑制蛋白1抗體
β-arrestin 2（beta-arrestin 2） β-抑制蛋白2抗體
ARIP2B（Activin receptor 2B） 激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體
ART（Artemin） Artemin抗體
ARα1/ADRA1B（α1-adrenergic receptor） α1腎上腺素能受體抗體
ARα1/ADRA1B（α1-adrenergic receptor） α1腎上腺素能受體抗體
 

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phospho-Syndecan-4 （pSer179） antibody 磷酸化多配體聚糖抗體
phospho-S6-Kinase （pThr421/pSer424） antibody 抗磷酸化S6蛋白激酶抗體
phospho-Glycogen Synthase Kinase 3α/β （pTyr279/216） antibody 磷酸化葡萄糖合成激酶3α/β抗體
phospho-STAT1 （pTyr701） antibody 抗磷酸化信號轉導與轉錄激活因子1抗體
ASCL1/MASH1（Achaete-scute homolog 1） 神經母細胞特異性轉移因子抗體
ASIC1/BNaC2（Acid-sensing ion channel 1） 酸敏感離子通道1抗體
ASPP1（apoptosis stimulating protein of P53 1） P53凋亡刺激蛋白1抗體
ASPP2（apoptosis stimulating protein of P53 2） P53凋亡刺激蛋白2抗體
AT/AGT（Angiotenogen） 血管緊張素原抗體
AT/AGT（Angiotenogen） 血管緊張素原抗體
Histone 組蛋白 / 1g
L-Homoarginine hydrochloride L-高精氨酸鹽酸鹽 [1483-01-8] 25g
L-Home-phenylalanine L-高苯丙氨酸 [943-73-7] 25g
Hyaluronic acid 透明質酸 from bovine vitreous humor [9004-61-9] 1g
Hyaluronic acid 透明質酸 from bovine vitreous humor [9004-61-9] 10mg
Hyaluronidase 透明質酸酶from bovine vitreous humor [37326-33-3] 25KU
Hyaluronic acid 透明質酸 from bovine vitreous humor [9004-61-9] 50mg
Hyaluronic acid 透明質酸 from bovine vitreous humor [9004-61-9] 100mg
Hyaluronic acid sodium salt 透明質酸鈉 [9067-32-7] 1g
Hyaluronidase, purified 透明質酸酶 from bovine vitreous humor [37326-33-3] 50KU
Hyaluronidase, purified 透明質酸酶 from bovine vitreous humor [37326-33-3] 300KU
Hydrazine hydrochloride 鹽酸肼 [2644-70-4] 100g